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感染梅毒之后可以在感染后的2-4周檢測出來，主要是檢測梅毒螺旋體抗體，如果梅毒螺旋體抗體陽性，可以作為確診的依據。在剛剛感染了梅毒螺旋體時，不會馬上產生梅毒螺旋體抗體，一般需要2-4周的窗口期，之后梅毒螺旋體抗體才會出現，或者是在感染了梅毒之后的2-3周，在皮膚上可以硬下疳，主要是在生殖器上可見到硬下疳。
硬下疳在出現壞死時，可以在潰瘍里取出滲出液，如果在滲出液當中可以查到梅毒螺旋體，也可以作為診斷的依據，但是檢出率比較低，最常用的方法還是進行梅毒螺旋體的抗體檢測來進行確診。